Введение 3

ГЛАВА 1. ИДЕНТИФИКАЦИЯ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ 6

1.1. Общая характеристика микроорганизмов 6

1.1.1 История изучения бактерий 6

1.1.2 Классификация бактерий 9

1.1.3 Метаболизм и биохимическая активность бактерий 12

1.2 Систематика, особенности метаболизма, клиническое значение энтеробактерий 16

1.3 Лабораторные методы идентификации бактерий 25

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 40

2.1 Материалы для исследования 40

2.2. Методы исследования 40

2.2.1 Традиционная схема микробиологического исследования. 40

2.2.2 Экспресс-метод микробиологического анализа 44

ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ 50

3.1 Характеристика исследуемой группы 50

3.2 Результаты идентификации микроорганизмов традиционным способом 51

3.3 Результаты идентификации микроорганизмов с помощью экспресс-метода 54

3.4 Сравнительный анализ традиционного и экспресс — методов

микробиологического анализа 56

Заключение 60

Список литературы 61

Приложение 1 63

Приложение 2 67

Приложение 3 69

Приложение4 71

Актуальность. Представители семейства Enterobacteriaceae широко распространены в природе: их обнаруживают в почве, воде, на растениях и, конечно, в кишечнике человека и животных. Они наиболее часто встречаются при анализе разнообразного клинического материала. Именно поэтому энтеробактерии на протяжении всей истории медицинской бактериологии являлись объектом постоянного внимания микробиологов.

Из всех клинически значимых бактерий энтеробактерии составляют около 50%, из грамотрицательных - примерно 80%. На долю энтеробактерий приходится около 50% всех возбудителей септицемии и более 70% возбудителей инфекций мочевого тракта. Если принимать во внимание иммунодефициты, предрасположенных лиц и распространение внутрибольничных инфекций, можно сказать, что энтеробактерии могут быть выделены из любого материала, доставленного в лабораторию.

Представителями этого обширного семейства являются как полезные симбионты человека - сапрофиты, так и патогенные бактерии – возбудители острых кишечных инфекций: брюшного тифа, паратифа, сальмонеллеза, дизентерии, колиэнтерита, эшерихиоза. В последнее десятилетие остро встала проблема заболеваний, вызываемых условно-патогенными микроорганизмами, к которым относятся Citrobacter, Klebsiella, Enterobacter, Proteus, Providencia, Pseudomonas и многие другие, изолируемые при острых кишечных инфекциях, менингитах, внутрибольничных гнойно-воспалительных заболеваниях респираторного, урогенитального трактов, постоперационных осложнениях. [15]

Классические кишечные инфекции вызывают безусловно-патогенные представители родов Salmonella, Shigella, Yersinia и Escherichia, пневмонию и ринит с характерными симптомами вызывают клебсиеллы, из ран и инфицированных мочевых путей часто выделяют Escherichia coli, Proteus spp., Enterobacter spp., Klebsiella spp.

Кроме представителей рода Shigella, многие энтеробактерии вызывают внекишечные инфекции (мочевые (особенно циститы), респираторные, раневые, кровяные, инфекции ЦНС). Их чаще вызывают представители 7 видов: E.coli, Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca, Proteus mirabilis, Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae и Serratia marcescens. Поскольку такие инфекции нередко угрожают жизни больного, существует необходимость в быстром выделении, идентификации соответствующих возбудителей и определении их чувствительности к антимикробным воздействиям. [20]

Именно поэтому одним из важных аспектов диагностики инфекционных заболеваний является идентификация изолируемых культур микроорганизмов.

При определении таксономического положения патогенных и условно-патогенных бактерий большое значение имеет разработка ускоренных и наиболее доступных способов изучения характеризующих их свойств. Своевременно поставленный этиологический диагноз – это не только снижение стоимости лабораторного исследования, но и вовремя назначенная целенаправленная терапия, уменьшение внутрибольничных инфекций, снижение продолжительности пребывания больного в стационаре.

Таким образом, выбор темы данной работы обусловлен тем, что обнаружение и точная идентификация энтеробактерий в клиническом материале крайне важны для постановки правильного диагноза и назначения своевременного и эффективного лечения больному.

Также необходимо отметить, что наряду с классическими традиционными методами биохимической идентификации энтеробактерий в современной микробиологии используются разнообразные экспресс-методы. И выбор наиболее эффективных методов с точки зрения их качества и техники является также очень важным. Этим фактом и обусловлена актуальность исследования.

Идентификацию микроорганизмов чаще всего проводится с использованием комплексов физиолого-биохимических признаков, описанных в специальном Определителе микробов (’’Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology’’).

Семейство энтеробактерий сегодня насчитывает более 100 видов и вариантов микроорганизмов. Традиционно основой их идентификации и дифференциации является метаболический профиль. Выявление фенотипических особенностей энтеробактерий, главным образом, сосредоточено на определении наличия или отсутствия сахаролитических, протеолитических и других ферментов и ферментных систем. Поскольку в тестах идентификации и дифференциации участвуют, как правило, живые микроорганизмы со свойственной им не только фенотипической, но и генотипической изменчивостью, очень важно проводить эти тесты в стандартных условиях [16]. Это важно, в первую очередь, для получении достоверных и воспроизводимых результатов. В отношении энтеробактерий такие тесты разрабатывались и апробировались на протяжении многих десятилетий. Некоторые из них приведены в данной работе.

Современное положение клинической и санитарной бактериологии диктует необходимость точной идентификации выделяемых микроорганизмов. Бактериологическая практика, наряду с автоматизированными и полу автоматизированными системами идентификации, нуждается в традиционных, выверенных многолетним опытом, общепринятых («пробирочных») тестах. Они являются «золотым стандартом», когда возникают спорные вопросы по видовой принадлежности отдельных штаммов, ведется оценка работоспособности новых тест-систем, лаборатории или ее персонала, ведется обучение в рамках микробиологического практикума

Цель: Сравнительный анализ традиционных методов биохимической идентификации и экспресс-методов в определении представителей семейства Enterobacteriaceae.

Задачи:

1) Проанализировать современные литературные источники;

2) Сравнить технику проведения традиционных и экспресс методов микробиологической диагностики энтеробактерий в лабораторных условиях.

3)Сравнить качество результатов исследования при использовании традиционного и экспресс-метода микробиологического анализа с обоснованием преимуществ одного из них.

Исследование проводилось на базе микробиологической лаборатории ГКБ № 23 им. "Медсантруд".

1) Алешукина А. В. Медицинская микробиология. - Ростов- н/Д: Феникс, 2003. - 473 с.

2) Боголюбская А.Л. Влияние инфекций передающихся половым путем на течение беременности / А.Л. Боголюбская // Материалы 1-го регион, науч. форума Мать и дитя:. Казань, 2007. С 18-19.

3) Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. — МИА, 2005. — С. 154-156.

4) Воробьев А.А. с соавт. Микробиология. М.: «Медицина», 2005.

5) Гусев М. В., Минеева Л. А. Микробиология. — М: Изд-во Московского университета, 2004. — 448 с.

6) Емцев В. Т. Микробиология. - М.: Дрофа, 2005. - 446 с.

7) Ильина Н. А., Карпеева Е. А. Общие и специфические свойства бактерий семейства Enterobacteriaceae // Современный мир, природа и человек. - 2009. - Том 1 — Вып. 1 — С. 12-15.

8) Колешко О.И. Микробиология. М.: Высшая школа, 2004.

9) Лабинская А.С. Практикум по микробиологическим методам исследования – М.: «Медицина», 2005.

10) Марри П. Клиническая микробиология. - М. : Мир, 2006 . - 425 с.

11) Медицинская микробиология / Коллект. автор, Байчурина, А.З., Гильманова, Г.Х., Григорьев, В.Е., др., Покровский, В.И., Поздеев, Оскар Кимович . - М. : Медицина, 1999 . - 1183 с.

12) Поздеев О.К. Медицинская микробиология. Под редакцией В.И.Покровского. – 2-е изд., испр.- М.: ГЭОТАР-МЕД, 2004.-768 с.

13) Работнова И. Л., Общая микробиология, М.: «Москва -Агропромиздат», 2005.

14) Руководство по инфекционному контролю в стационаре. Пер. с англ./ Под ред. Р. Венцеля, Т.Бревера, Ж-П. Бутцлера – Смоленск: МАКМАХ, 2003 - 272 с.

15) Сасова В.А., Залесских Н.В. Идентификация энтеробактерий и стафилококков, Информационные материалы - Нижний Новгород ,2007.

16) Сиволодский Е.П. Систематика и идентификация энтеробактерий - Санкт-Петербургский НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Отдел новых технологий, 2008г

17) Сидоренко С.В. Представители семейства Enterobacteriaceae: клиническое значение и этиотропная терапия /Инфекции в хирургии/ том 1, № 3, 2003, с. 86

18) Сидоренко С.В., Яковлев С.В. Инфекции в интенсивной терапии. 2 –изд., перераб. и доп. – М.: Бионика, 2003. – 208 с.

19) Скала Л.З., Сидоренко С.В. Практические аспекты современной клинической микробиологии. – Тверь: Триада, 2004

20) Смирнов И.В. Фенотипическая идентификация энтеробактерий (справочное пособие для врачей и интернов по специальности «бактериология» - Рязань: РязГМУ, 2001.

21) Титов Л.П., Вотяков В.И, Кожемякин А.К, Мосина Л.И.. Эволюция микробов и ее медицинское значение. Здравоохранение. 2002. №8. Стр.30-35.

22) Шлегель Г.Г. История микробиологии. — М: изд-во УРСС, 2002.

23) Antao E.M., Wieler LH, Ewers C. Adhesive threads of extraintestinal pathogenic Escherichia coli. Gut Pathog, 2009, 10, 1, 1, 22

24) Berdgy’s Manual of Systematic Bacteriology, 2001. Vol.1. pp.155-166.

25) Nichols G.L. Foodborne protozoa. In: Thurnam D.I., Toberts T.A., editors. Health and the Foodchain. British Medical Bulletin. 2000. p. 209-35.

26) Souza R.R., Fabiana H. Enteropathogenic Escherichia coli, Samonella, Shigella and Yersinia: cellular aspects of host-bacteria interactions in enteric diseases. Gut Pathogens 2010, 2:8 doi:10.1186/1757-4749-2-8.

27) Vincent C., Boerlin P., Daignault D. et al. Food reservoir for Escherichia coli causing urinary tract infections. Emerg Infect Dis, 2010, 16, 1, 88-95.

28) http://www.bd.com/

29) http://vetfac.narod.ru/kielwein0milk/book061.htm

30) http://meduniver.com/Medical/Microbiology/457.html

31) http://www.primer.ru/std/gallery_std2/enterobacter.htm

32) http://meduniver.com/Medical/Microbiology/346.html

33) http://infopravo.by.ru/fed1991/ch03/akt14204.shtm

34) http://english.cohga.net/picasa/biochemicals/

Примечаний нет.